Tại sao chúng ta sử dụng một kiểm soát tiêu cực trong PCR?

Tại sao chúng ta sử dụng một kiểm soát tiêu cực trong PCR?
Anonim

Câu trả lời:

Xem bên dưới

Giải trình:

PCR hoạt động từ một DNA mẫu. Hãy nói rằng bạn đang xét nghiệm HIV (HIV là một loại virus RNA, nhưng khi nó xâm nhập vào tế bào, nó sẽ được chuyển thành DNA …. vì vậy sẽ có DNA HIV trong một tế bào bị nhiễm bệnh). Các mồi bạn sử dụng sẽ tạo ra một sản phẩm (khuếch đại) tương ứng với một phần của DNA HIV. Nếu bạn thấy bộ khuếch đại này, thì bạn có trình tự HIV hiện diện ….. nhưng nếu bạn không có kiểm soát âm tính, bạn có thể bị nhiễm bẩn.

PCR là cực kỳ senstitive. Có nhiều giải pháp được sử dụng trong PCR (nước, đệm, dNTPs, enzyme) … và tất cả chúng đều có thể dễ dàng bị nhiễm DNA từ các mẫu khác, hoặc thậm chí từ các khuếch đại được tạo ra trong phản ứng bạn đã làm ngày hôm qua. Vì vậy, nếu bạn có mẫu DNA của Bệnh nhân X và bạn đang kiểm tra HIV bằng PCR, thì các đoạn mồi PCR có thể tạo ra một sản phẩm từ DNA HIV trong mẫu DNA của Bệnh nhân X (nếu người đó bị nhiễm HIV) hoặc có thể loại bỏ nó khỏi ô nhiễm. Nhưng bạn không thể biết đó là do nhiễm bẩn hay từ HIV trong DNA của bệnh nhân.

Vì vậy, bạn chạy một điều khiển nước. Ống 1 bạn đặt tất cả các thành phần của phản ứng và đối với DNA bạn chỉ thêm nước. Đây là sự kiểm soát tiêu cực. KHÔNG nên khuếch đại ở đây. Trong ống 2, bạn đặt tất cả các thành phần phản ứng và DNA của bệnh nhân X. Nếu bạn nhận được một sản phẩm ở đây, (và không có gì trong Ống 1), Bệnh nhân X có thể có DNA HIV trong DNA của anh ấy / cô ấy. Nếu bạn nhận được một sản phẩm trong cả Ống 1 và Ống 2, bạn có vấn đề về ô nhiễm và bạn không thể biết HIV trong mẫu của Bệnh nhân là do bệnh hay do nhiễm bẩn.

Vì vậy, bạn luôn luôn chạy một điều khiển nước (nước thay cho DNA).