Trong xét nghiệm ELISA, kháng thể chính & kháng thể thứ cấp làm gì?

Trong xét nghiệm ELISA, kháng thể chính & kháng thể thứ cấp làm gì?
Anonim

Câu trả lời:

Điều đó phụ thuộc vào loại xét nghiệm ELISA.

Giải trình:

ELISA = Xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme.

Có nhiều loại xét nghiệm ELISA khác nhau. Những gì bạn cần là:

  • kháng thể với một enzyme gắn vào nó
  • kháng nguyên mà kháng thể liên kết
  • cơ chất của enzyme gây ra phản ứng có thể đo lường được

Các enzyme gắn với kháng thể thường là HRP (horseradish peroxidase). HRP có thể phản ứng với các chất nền khác nhau có thể thay đổi màu sắc hoặc phát ra ánh sáng, cả hai đều có thể đo được.

Hình ảnh cho thấy một cái nhìn tổng quan về các loại khác nhau các xét nghiệm ELISA. Tôi sẽ giải thích cách họ làm việc dưới đây.

ELISA trực tiếp

Một tấm được phủ kháng nguyên (Ag) và một kháng thể chính với enzyme được thêm vào. Khi chất nền được thêm vào, phản ứng sẽ xảy ra và tỷ lệ thuận với lượng tương tác kháng thể-kháng nguyên.

ELISA gián tiếp

Một lần nữa, một tấm được phủ kháng nguyên và kháng thể chính liên kết với kháng nguyên. Một kháng thể thế tục được thêm vào mà liên kết với kháng thể đầu tiên. Kháng thể thứ 2 chứa enzyme phản ứng với cơ chất.

Sandwich ELISA

Ở đây có hai hoặc ba kháng thể có liên quan. Một kháng thể bắt giữ được gắn vào các tấm và liên kết với kháng nguyên. Tiếp theo là các bước tương tự như phương pháp trực tiếp (chỉ một kháng thể) hoặc phương pháp gián tiếp (hai kháng thể).

ELISA cạnh tranh

Đôi khi được gọi là ELISA ức chế, phức tạp hơn một chút. Một tấm được phủ kháng nguyên cần nghiên cứu. Một kháng thể chính với enzyme đầu tiên được ủ với một mẫu có nồng độ kháng nguyên chưa biết. Điều này sau đó được thêm vào đĩa, cho phép các kháng thể vẫn còn tự do phản ứng với kháng nguyên trên đĩa. Sau khi các phức hợp kháng thể-kháng nguyên của mẫu được rửa sạch khỏi chất nền được thêm vào.

Khi mẫu chưa biết có nhiều kháng nguyên, sẽ có ít kháng thể tự do liên kết với tấm = tín hiệu thấp hơn.