Câu trả lời:
Thông thường đây là một xét nghiệm đặc hiệu kháng thể.
Giải trình:
Trong ELISA, rất khó để biết liệu kháng thể của bạn có liên kết với protein quan tâm của bạn hay không, một loại protein hoàn toàn khác hoặc một loạt các protein.
Western blot sẽ được sử dụng để kiểm tra tính đặc hiệu của kháng thể (bạn nên lưu ý rằng Western blot có thể không phát hiện tất cả các phản ứng chéo với protein không chính xác).
Ở Western blot, bạn có thể thấy kích thước của protein mà kháng thể được liên kết (bạn không thể trong ELISA). Do đó, ví dụ, nếu kháng thể của bạn phải liên kết với protein 56 kDa và bạn thấy một dải ở ~ 56 kDa trên blot thì bạn có thể tin tưởng một cách hợp lý rằng kháng thể liên kết với protein chính xác.
Mặt khác, nếu bạn thấy một dải ở 32 kDa, bạn có thể kết luận rằng kháng thể liên kết với protein sai. Tương tự như vậy, nếu nhiều dải xuất hiện trên Western blot thì điều đó sẽ gợi ý (trong trường hợp không có sự phân hủy protein) rằng kháng thể liên kết với một loạt các protein khác nhau.
Trong ví dụ về dải 32 kDa xuất hiện trên gel và cũng là nhiều dải, nó sẽ gợi ý rằng kháng thể thiếu tính đặc hiệu đối với ELISA và bất kỳ kết quả nào nhìn thấy trong ELISA có thể không đặc trưng cho protein quan tâm.
Nếu tôi được chạy loại xét nghiệm này, tôi có thể bao gồm một loại thuốc thử "can thiệp" để kiểm tra kháng thể. Ví dụ, nếu tôi đã tăng kháng thể lên peptide, tôi có thể đưa peptide vào dung dịch kháng thể chính để kiểm tra sự gắn kết chính xác. Đó là, với sự hiện diện của peptide, tôi sẽ không thấy dải hoặc không có kết quả từ ELISA vì kháng thể chính của tôi sẽ không thể liên kết do sự hiện diện của peptide dư thừa.